Mananase

PRINCIPIO di Mananase

Il substrato impiegato è galattomannano di carruba reticolato con azurina (AZCL-galattomannano). Il substrato viene preparato mediante tintura e reticolazione del galattomannano di carruba altamente purificato per produrre un materiale che si idrata in acqua ma è insolubile in acqua. L'idrolisi da endo-1,4-β-mannanasi produce frammenti colorati solubili in acqua e la velocità di rilascio di questi (aumento dell'assorbanza a 590 nm) può essere correlata direttamente all'attività enzimatica.
Un'unità di attività è definita come la quantità di enzima necessaria per rilasciare 1 μmol di equivalenti di zucchero riducente del mannosio al minuto nelle condizioni di dosaggio definite.

REAGENTIdi Mananase
1. Tampone di riserva 2M (pH 4,0) - Aggiungere 107,0 mL di acido acetico glaciale (CH3COOH) a 800 ml di acqua distillata. Questa soluzione viene regolata a pH 4.0 mediante l'aggiunta di una soluzione di NaOH 2N. Il volume è regolato a 1 litro.
Tampone di diluizione 2,50 mM (pH 4,0) - Utilizzare 25 ml di tampone di riserva e aggiunto a 900 ml di acqua e il pH viene regolato a pH 4,0 mediante aggiunta goccia a goccia di soluzione HCl 1N. Il volume è regolato a 1 litro.
Base Trizma 3,2% (come Arabinase / Beta Glucanasi) - Sciogliere 2 g di Trizma Base â 99 ¥ 99% (Sigma T-1503) in acqua deionizzata e portare a volume 100 ml.
4.Substrato: utilizzare compresse pronte per l'uso come compresse Beta-Mannazyme.

PREPARAZIONE DELLA SOLUZIONE ENZIMATICA
Pesare tutti i campioni con una precisione di 4 cifre. Triturare tutti i campioni solidi. Preparare le soluzioni enzimatiche in tampone acetato di sodio.

PROCEDURAdi Mananase
1.Pre-equilibrare un'aliquota di 0,5 ml di Preparato enzimatico adeguatamente in provette medie a 40 ° C.
1.Iniziare la reazione aggiungendo una compressa di Beta-Mannazyme. La compressa si è idratata rapidamente. La sospensione non deve essere agitata.
2. Terminare la reazione esattamente 10 minuti dopo l'aggiunta della compressa aggiungendo 10 ml di soluzione Trizma Base sotto vigorosa agitazione su un miscelatore a vortice.
3.Lasciare le provette a temperatura ambiente per circa 5 minuti, quindi mescolare di nuovo.
4. Filtrare il contenuto del tubo attraverso una carta da filtro.
5. Preparare un substrato / enzima vuoto aggiungendo una compressa di β-Mannazyme a 0,5 ml di tampone di estrazione. Incubare a 40 ° C per 10 min, aggiungere 10 ml di Trizma Base 2% e filtrare dopo 5 minuti.
6. L'assorbanza delle soluzioni di reazione viene misurata a 590 nm contro il bianco. Se l'assorbanza è superiore a 1,4 diluire un'aliquota dell'estratto enzimatico con un volume uguale di tampone di estrazione / diluizione e ripetere il test.

CALCOLOdi Mananase
L'attività endo-mananasi nel campione da analizzare viene determinata facendo riferimento alla curva standard per convertire i valori di assorbanza in milli-Unità per dosaggio (cioè per 0,5 ml). In alternativa, per valori di assorbanza compresi tra 0,1 e 1,5, questi i valori possono essere calcolati facendo riferimento all'equazione:
Y = MX + C.
Y = attività endo-mannanasi (in milliUnità / dosaggio, cioè per 0,5 ml). M = Pendenza del grafico di calibrazione.
X = assorbanza della reazione a 590 nm (meno il bianco di reazione, C = intercetta sull'asse Y.
o leggere contro il bianco di reazione).
I valori di M e C variano leggermente tra i lotti di compresse Beta-Mannazyme. I valori M e C per il particolare lotto di compresse sono forniti con le compresse.

endo - Attività mannanasica per ml o go preparato originale:

U / g = Y x 100 x 2
Peso x 1000
Dove:
Y = Attività endo-mananasica (in milliUnità / dosaggio, ovvero per 0,5 ml).
100 = 1 go ml di enzima estratto in 100 ml di tampone.
2 = Conversione da 0,5 ml (come testato) a 1,0 ml.
1/1000 = Conversione da milliUnits a Units.

Wt = Peso finale della diluizione enzimatica (g / mL)

CERTIFICATO DI ANALISI

Confezionamento e conservazione

Busta da imballaggio per alimenti solidi, 25 kg / barile.

Mananase deve essere conservato in luoghi asciutti, freschi e ben ventilati, lontano dal sole, dal calore.

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