La polvere di destranasi deve essere conservata in luoghi asciutti, freschi e ben ventilati, lontano dal sole, dal calore.
4.2 Sample determination
4.2.1 enzyme-like preparation
The fermentation broth was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes, the supernatant was taken, and the enzyme solution was appropriately diluted by a certain multiple, so that the final OD540 was in the OD540 range of 0.1-0.6 mg / mL glucose content.
4.2.2 enzyme-like assay
(1) Take 900μL of pH 5.5 buffer to dissolve dextran T-2000 to make a 2.0% solution, add it as a substrate to four suitable test tubes, and place each test tube in a 55℃thermostatic water bath to incubate 5min.
(2) Add 0.1 mL of the appropriately diluted enzyme solution to three of the pre-heated test tubes, and add 0.1 mL of distilled water as the blank for the precise reaction for 10 minutes.
(3) Immediately add 2 mL of DNS to each of the above four test tubes and place in a boiling water bath for precise reaction for 5 min, then quickly cool down, and then make up to 25 mL with distilled water.
(4) The spectrophotometer is used to zero the instrument with water, and the absorbance of each sample tube and blank at 540 nm is measured in a cuvette with an optical path of 1 cm. Record data.
4.2.3 Calculation
Measure the average of the OD values of each measured parallel sample, and calculate the unit of enzyme activity according to the following formula
Dextranase activity (U / mL) = 1000 n (A-b) / (aMt)
Where A is the average value of sample OD540
b and a are coefficients of the standard curve
n: dilution ratio of enzyme solution
t: enzymatic reaction time = 10
M: Molar mass of glucose = 180.16
CERTIFICATE OF ANALYSIS
1 Principio
La polvere di destranasi idrolizza i legami del glicoside 1,6-α-D-glucano e rilascia i gruppi di zucchero riducenti per reagire con acido 3,5-dinitrosalicilico (reagente DNS). Il contenuto è direttamente proporzionale. Il valore di assorbimento della luce viene misurato a 540 nm e la curva standard (calcolata come glucosio) può essere utilizzata per ottenere la quantità di zucchero riducente e l'attività della glucanasi può essere calcolata in base a questo.
2.7 pHmetro: precisione 0,01 unità pH
3.1 Preparazione del tampone disodio idrogeno fosfato-acido citrico a pH 5,5: Soluzione A: 20,369 g di disodio idrogeno fosfato dodecaidrato, sciolto con circa 200 ml di acqua; Soluzione B: 4,530 g di acido citrico monoidrato, con circa 200 ml di acqua Sciogliere; mescolare il liquido A e il liquido B e portare a 500 ml. Sterilizzare a 121 â „ƒ per 20 min.
3.2 Preparazione della soluzione al 2% di destrano (T-2000): pesare accuratamente 2 g di destrano (T-2000) in un becher da 100 ml, aggiungere pH = 5,5 tampone disodio idrogeno fosfato-citrato per sciogliere, attendere fino a Dopo la completa dissoluzione, trasferire in un 100 ml matraccio tarato e portare a 100ml con tampone.
3.3 Preparazione della soluzione DNS:Soluzione di glucosio (1 mg / ml): pesare accuratamente 0,100 g di glucosio e sciogliere fino a un volume finale di 100 ml con una soluzione tampone a pH = 5,5.
4 Fasi di analisi
4.1 Disegno della curva standard
(1) Prendere circa 1 grammo di glucosio, infornare a 60 ° per 30 minuti, quindi aumentare la temperatura a 80 °, quindi infornare per 30 minuti, quindi aumentare la temperatura a 104 °, infornare per 1 ora e raffreddare per un uso successivo.
(2) Preparazione della soluzione standard di glucosio anidro: 0,1000 grammi di glucosio vengono pesati accuratamente, sciolti e portati a 100 mL.
(3) Prendere 6 provette colorimetriche con graduazione da 25 ml e testare secondo la tabella seguente:
Busta da imballaggio per alimenti solidi, 25 kg / barile.
