Beta glucano
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Beta glucano

Applicazione e principio Questa procedura viene utilizzata per determinare l'attività beta glucano di preparati enzimatici derivati ​​da Aspergillus niger var. e Bacillus subtilis var.

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Applicazione e principio

Applicazione e principio This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Reagenti e soluzioni
Tampone fosfato Sciogliere 13,6 g di fosfato monobasico di potassio in circa 1900 mL di acqua, aggiungere una soluzione di idrossido di sodio al 70% fino a quando il pH è 6,5 ± 0,05, quindi trasferire la soluzione in un matraccio tarato da 2000 mL, diluire a volume con acqua e mescolare .
Neocuproine Solution A Sciogliere 40,0 g di carbonato di sodio anidro, 16,0 g di glicina e 450 mg di solfato rameico pentaidrato in circa 600 mL di acqua. Trasferire la soluzione in un matraccio volumetrico da 1000 mL, diluire a volume con acqua e mescolare.
Neocuproine Solution B Sciogliere 600 mg di neocuproine cloridrato in circa 400 mL di acqua, trasferire la soluzione in un matraccio tarato da 500 mL, diluire a volume con acqua e mescolare. Scartare quando si sviluppa un colore giallo.
Substrato di lichenina Macinare 150 mg di lichenina (Sigma Chemical Co., n. Di catalogo L-6133 o equivalente) fino a ottenere una polvere fine in un mortaio e scioglierlo in circa 50 mL di acqua a circa 85 °. Dopo che la soluzione è completa (da 20 a 30 min), aggiungere 90 mg di sodio boroidruro e continuare a riscaldare sotto il punto di ebollizione per 1 ora. Aggiungere 15 g di Amberlite MB-3 o una resina a scambio ionico equivalente e mescolare continuamente per 30 min. Filtrare con l'ausilio di un aspirapolvere attraverso carta da filtro Whatman n. 1, o equivalente, in un imbuto Büchner e lavare la carta con circa 20 ml di acqua. Aggiungere 680 mg di fosfato di potassio monobasico al filtrato e filtrare nuovamente attraverso un tampone filtrante Millipore da 0,22 µm o equivalente. Lavare il tampone con 10 mL di acqua e regolare il pH del filtrato a 6,5 ​​± 0,05 con idrossido di sodio 1 N o acido cloridrico 1 N. Trasferire il filtrato in un matraccio volumetrico da 100 ml, diluire a volume con acqua e mescolare. Conservare a 2 ° - 4 ° per non più di 3 giorni.
Soluzione standard di glucosio Sciogliere 36,0 mg di destrosio anidro in tampone fosfato in un matraccio tarato da 1000 mL, diluire a volume con acqua e mescolare.
Preparazione del test Preparare una soluzione dal campione di preparazione enzimatica in modo che 1 mL della diluizione finale contenga tra 0,01 e 0,02 unità di beta glucano. Pesare il campione, trasferirlo in un matraccio volumetrico di dimensioni adeguate, diluire a volume con tampone fosfato e miscelare.

Procedura
Pipettare 2 mL di substrato di lichenina in ciascuna delle quattro provette separate graduate a 25 mL e riscaldare le provette a bagnomaria a 40 ° per 10-15 minuti per equilibrare.
Dopo l'equilibrio, aggiungere 1 mL di tampone fosfato alla provetta 1 (bianco del substrato), 1 mL di soluzione standard di glucosio alla provetta 2 (standard di glucosio), 4 mL di soluzione A di Neocuproine e 1 mL di preparazione del test alla provetta 3 (bianco dell'enzima ) e 1 mL della preparazione del test nella provetta 4 (campione). Preparare una quinta provetta per il tampone bianco e aggiungere 3 mL di tampone fosfato.
Incubare le cinque provette a 40 ° per 15 minuti esatti, quindi aggiungere 4 mL di Neocuproine Solution A alle provette 1, 2, 4 e 5. Aggiungere 4 mL di Neocuproine Solution B a tutte e cinque le provette e tappare ciascuna con un marmo di vetro di dimensioni.
[ATTENZIONE: non utilizzare tappi di gomma. ]
Riscaldare le provette in un bagnomaria bollente per esattamente 12 minuti per sviluppare il colore, quindi raffreddare a temperatura ambiente in acqua fredda e regolare il volume di ciascuna a 25 ml con acqua. Tappare le provette con Parafilm, o altra chiusura adatta, e mescolare capovolgendo più volte.
Determinare l'assorbanza di ciascuna soluzione a 450 nm in celle da 1 cm, con uno spettrofotometro adatto, contro il bianco del tampone nella provetta 5.

Calcolo
Una unità beta glucano (BGU) è definita come la quantità di enzima che libererà zucchero riducente (come equivalenza del glucosio) a una velocità di 1 µmol / min nelle condizioni del test.
Calcola l'attività del preparato enzimatico preso per l'analisi come segue:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 × 15 × µg campione]

in cui A4 è l'assorbanza del campione (provetta 4), A3 è l'assorbanza del bianco enzimatico (provetta 3), A2 è l'assorbanza dello standard di glucosio (provetta 2), A1 è l'assorbanza del bianco del substrato (provetta 1), 36 sono i microgrammi di glucosio nella soluzione standard di glucosio, 106 è il fattore che converte i microgrammi in grammi, 180 è il peso di 1 µmol di glucosio e 15 è il tempo di reazione, in minuti.


CERTIFICATO DI ANALISI


nome del prodotto Beta glucanasi    
Altro nome N / A Paese d'origine Cina
Sforzo Aspergillus Niger Data di produzione 23 LUG 2018
Numero di lotto BG18072301 Data di scadenza 22 LUG 2020
Pacchetto 25 kg / secchio Quantità 50kg
PROTOCOLLO SPECIFICHE RISULTATI METODO
ANALISI FISICA E CHIMICA
Descrizione Polvere da giallo chiaro a marrone chiaro Conforme Visivo
Odore e sapore Odore e sapore caratteristici Conforme Gusto
Umidità NMT 7% 4.1% Analizzatore di umidità
IDENTIFICAZIONE
Attività identificabile Positivo per l'attività della bromelina Conforme In casa
ATTIVITÀ
Attività beta glucanasi NLT 5.000 BGU / g 5.024 BGU / g FCC VII
MICROBIOLOGICO
Conta batterica totale
Batteri coliformi (CFU / g)
Muffe e lieviti
E.Coli
Salmonella
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
NMT 3.000 CFU / g
NMT 30 CFU / g
NMT 100 CFU / g
Assente
Assente
Assente
Assente
Conforme
Conforme
Conforme
Conforme
Conforme
Conforme
Conforme
FDA BAM Online Ch.3
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch. 2
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch.5
FDA BAM Online Ch.12
AOAC
METALLI PESANTI
Piombo
Mercurio
Cadmio
Arsenico
NMT 3 ppm
NMT 0,1 ppm
NMT 1 ppm
NMT 1 ppm
Conforme
Conforme
Conforme
Conforme
USP <231>
USP <231>
USP <231>
USP <231>
Conservazione: conservare in luogo fresco e asciutto al riparo dalla luce, tenere il fusto chiuso quando non in uso.
Conclusione: conforme agli standard FCC.
Periodo di validità: il periodo di validità nelle condizioni di conservazione prescritte e l'imballaggio a tenuta d'aria sarà di 2 anni.
Il prodotto è CONFORME alle suddette specifiche
Approvato da RICKY H. ZHUA Firmatario autorizzato


* Le informazioni di cui sopra sono una traduzione diretta delle informazioni fornite a Newgen Biotech dal produttore di questo prodotto. Questo certificato di analisi deve essere utilizzato a scopo informativo e non è inteso come sostituto di una rigorosa analisi del controllo di qualità da parte dell'acquirente di questo prodotto.


Confezionamento e conservazione

Busta da imballaggio per alimenti solidi, 25 kg / barile.


Conservare in luoghi asciutti, freschi e ben ventilati lontano dal sole, dal calore.

Pagamento:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC e così via.

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